HPLC法测定四君颗粒中的甘草酸含量

【摘要】[目的]用HPLC法测定四君粒颗中甘草酸的含量。[方法]HPLC用外标一点法，KromasilODS1C18柱，甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(67∶33∶1)为流动相，流速为1.0ml/min，λ=250nm;[结果]甘草酸在0.1～1?g范围内呈良好线性，回归方程为Y=444185X-9336.9r=0.9992，平均加样回收率99.7%、RSD%为1.0%(n=6);[结论]方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，为四君子粒颗中甘草的定量分析提供了科学有效的方法。

【关键词】四君子粒颗;甘草酸;HPLC

四君颗粒由党参、白术、茯苓和甘草四味中药组成，具有益气健脾的功能，是一古有成方，是组成各种处方的基础，没有含量测定，考虑到对照品来源的困难，甘草虽然不是君药，但在处方中起着极为重要的左使作用，加之对照品来源可靠易得，为此选择测定处方中甘草所含甘草酸的含量。

1仪器与试药

日本岛津LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器;浙大N2010数据工作站。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他有关试剂均为分析纯。对照品：甘草酸铵对照品(批号为110731-200407)购自中国药品生物制品检定所，作含量测定用。四君子颗粒浙江得恩德制药有限司(批号为050104、050105、050106)。市售药品：天津百慕药业有限公司，批号：0410003。

2分析方法

2.1色谱条件

(1)色谱柱：ODSC18柱(4.6×150mm，5μm)。(2)流动相：甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(67∶33∶1)。(3)检测波长：测定甘草酸的紫外吸收波长，证明他们在250nm有较大吸收，确定为250nm为检测波长，阴性对照无吸收峰。(4)流速：1.0ml/min;进样量：10μl。在此色谱条件下，对照品(图谱1)及经前处理后的供试品的甘草酸与其它组分基本达到分离(图谱3)。

2.2对照品的制备

精密称取真空干燥(五氧化二磷)24h的甘草酸单铵盐对照品适量，精密称定，用流动相溶解并制成每1ml含50μg(己折合为甘草酸)的溶液，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg折合甘草酸为0.1959mg)。

2.3供试品溶液的制备

取本品粉末约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相约45ml，超声处理(功率250W，频率20kHz)30min，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4标准曲线

取“对照品的制备”项下的对照品溶液，分别进样2、5、10、15和20μl，按选定的色谱条件测定峰面积，以进样量(μl)为横坐标，峰面积为纵坐标，作图并进行线性回归，计算回归方程为Y=444185X-9336.9r=0.9992结果表明甘草酸在0.1～1.0μg范围内的良好线性，见表1。表1标准曲线(略)

2.5检测限

精密称取甘草酸单铵盐适量，用流动相多级稀释后进样，结果在信噪比(S/N)为3时，本法的最低检测限为0.01ng/ml。结果见图1。

2.6阴性样品的测试

做缺甘草的样品;按供试品制备法制备供试品后测定，分别测定在甘草酸相应位置无明显峰出现(图2)。

2.7精密度试验

(1)日内精密度试验：取甘草酸铵对照品溶液，同一天不同时间进样6次，每次10μl，记录峰面积，结果RSD为0.1%，见表2。(2)日间进样精密度：取甘草酸铵对照品溶液，连续6天，每天进样1次，每次10μl，记录峰面积结果RSD为0.1%，见表2、3。表2日内精密度试验结果(略)

以上结果表明，系统精密度良好。

2.8样品测量的重现性试验

取批号为050104的四君子颗粒样品粉末6份，每份约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相约45ml，超声处理(功率250W，频率20kHz)30min，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液各10μl及对照品溶液10μl进样，计算样品中甘草酸含量，考查测定结果的一致性，测定结果RSD为0.1%见表4。结果表明，测定结果的重现性良好。表4样品测定重现性试验结果(略)

2.9加样回收率试验

取批号为050104的四君子颗粒样品粉末约2.5g，精密称定，共6份，分别置50ml量瓶中，加流动相约30ml，精密加入浓度为0.2mg/ml的甘草酸铵对照品溶液10ml，超声处理(功率250W，频率20kHz)30min，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液各10μl及对照品溶液10μl进样，计算样品中甘草酸含量，测定结果的一致性，测定结果见表5。结果表明，本测定方法的回收率良好。表5加样回收试验结果(略)

2.10样品测定结果见表6。表6样品甘草酸含量(略)

从对三批四君子颗粒中试样品的测定结果可以看出，样品中甘草酸铵的平均含量为11.8mg/袋，结合药材(炮制品)含量(1.7%)、药材的水分(10%)、提取得率、制剂得率、目前市场上已有产品的含量(6.2mg/袋)和目前中药材市场的具体情况，及本公司测定结果及大生产时实际，将成品每袋折合为甘草酸含量定为不得少于8.0mg。

3讨论

甘草酸的含量测定方法虽然比较成熟，但在复方制剂中还是会受到其它药材成分的影响，经样品前处理后，方法在本品中还是获得比较结果。市售品含甘草酸的量各厂差异较大，我们测定多批，高的每袋达14mg，低的每袋只有4mg，认为很有必要规定甘草酸的含量，以确保药品质量。