HPLC法测定阿莫西林双氯西林钠胶囊含量

【摘要】目的：建立阿莫西林双氯西林钠胶囊中阿莫西林和双氯西林钠的含量测定方法。方法：采用ShimadzuVP?ODS色谱柱，流动相为0.008mol/L十二烷基硫酸钠(用磷酸调节至pH4.5)?甲醇(体积比68∶32),检测波长225nm。结果：阿莫西林和双氯西林在该色谱条件下均有合适的保留,测定可在10min内完成。阿莫西林在0.0050～1.0000mg/mL，双氯西林在0.0025～0.5036mg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。阿莫西林和双氯西林钠平均回收率(n=9)分别为99.4%(RSD=1.0%)和99.1%(RSD=0.97%)。结论：该方法准确、重复性好、灵敏度高,可用于该产品的质量控制。

【关键词】阿莫西林双氯西林钠胶囊/高效液相色谱法/阿莫西林/双氯西林

阿莫西林、双氯西林属β?内酰胺类抗生素，阿莫西林对需氧革兰氏阳性菌及部分革兰氏阴性菌具抗菌活性，双氯西林具耐酸、耐酶等特点，对葡萄球菌和革兰阳性菌具抗菌活性。研究表明，阿莫西林—双氯西林对常见的病原菌具良好抗菌作用,对伤寒沙门菌也具有良好抗菌作用,可作为治疗呼吸道感染、单纯性皮肤软组织感染和伤寒等的首选药物之一[1]。该品种目前在中国药典、美国药典、日抗基和英国药典均未收载。文献[2-4]采用HPLC法同时测定阿莫西林、双氯西林的含量，以磷酸盐缓冲液和乙腈为流动相。但是阿莫西林和双氯西林的极性相差较大，两者的保留时间相差较大，在该色谱条件下为了保证双氯西林有适宜的保留时间，阿莫西林往往在溶剂峰左右出峰，几乎没有保留。本文经优化色谱条件，改用离子对试剂和甲醇为流动相的RP?HPLC法，使两者均具有适宜的色谱保留时间，可用于阿莫西林和双氯西林制剂的含量测定。

1仪器和试药

Agilent1100高效液相色谱仪，SartoriusBP211D万分之一电子天平。

甲醇(色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司出品，批号：051221101);十二烷基硫酸钠(广州市医药公司进口分装，批号：980503);阿莫西林对照品(中国药品生物制品检定，批号：130409?200208，质量分数：86.2%);双氯西林对照品(BrightFuturePharm.Fty,批号：B4520042，质量分数：91.4%);阿莫西林双氯西林钠胶囊(香港澳美制药厂提供，规格：0.375g);实验用水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：ShimadzuVP?ODS(250mm×4.6mm);流动相：0.008mol/L十二烷基硫酸钠(用磷酸调节pH值至4.5)?甲醇(体积比68∶32);流速1mL/min;检测波长225nm;进样量20μL。色谱图见图1。

A空白品B对照品C样品1.双氯西林2.阿莫西林

图1双氯西林和阿莫西林的HPLC色谱图(略)

Fig.1HPLCchromatogramsofamoxicillinanddicloxacillin

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的配制

取阿莫西林、双氯西林对照品适量，精密称定，加0.02mol/L磷酸盐缓冲液制成每1mL含阿莫西林50μg、含双氯西林25μg的混合液，作为对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的配制

取供试品20粒，除去囊壳，均匀研细并混合，精密称取适量(约相当于阿莫西林200mg,双氯西林100mg),置200mL容量瓶中，加0.02mol/L磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1mL，置20mL容量瓶中，加0.02mol/L磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3专属性考察

取阿莫西林双氯西林钠胶囊内容物，分别用药物光照试验仪强光照射24h和高温95℃进行24h强力破坏，分别取样品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成含阿莫西林2mg/mL和双氯西林1mg/mL的溶液,用0.45μm滤膜滤过，精密量取续滤液20μL，按“2.1”项的色谱条件进样测定。试验结果表明，杂质峰与两主峰均有较好的分离，不影响测定。

2.4线性范围的确定

分别取阿莫西林、双氯西林对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成含阿莫西林为0.0050～1.0000mg/mL和双氯西林为0.0025～0.5036mg/mL的溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，以峰面积(A)为纵坐标，以质量浓度(ρ)为横坐标，得阿莫西林和双氯西林的线性回归方程分别为：A=27989ρ-26.88，r=0.9999(n=7);A=46883ρ-48.554，r=0.9999(n=7)。结果表明，阿莫西林在0.0050～1.0000mg/mL,双氯西林在0.0025～0.5036mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

2.52.6溶液稳定性试验

取同一批号供试品溶液于0、2、4、6、8h内依法测定，结果阿莫西林及双氯西林的峰面积RSD分别为1.0%和1.3%(n=5)，表明溶液在8h内稳定。

2.7重复性试验

取同一批号样品6份，分别按“2.2.2”项平行制备溶液，进样测定，外标法计算阿莫西林和双氯西林的含量RSD分别为0.6%和0.8%(n=6)，表明试验的重复性良好。

2.8干扰试验

取阴性空白样品液，依法进行测定。结果表明空白辅料对样品测定无干扰，色谱图见图1。

2.9加样回收率试验

取已知浓度的供试品溶液加入不同浓度的对照液，制成含阿莫西林标示量的80%、100%、120%的溶液，按含量测定项下的方法进行试验，考察其加样回收率。阿莫西林的平均回收率为99.4%,RSD为1.0%;双氯西林的平均回收率为99.1%,RSD为0.970%。见表1。

表1阿莫西林双氯西林钠胶囊回收率(略)

Tab.1Recoverytestofamoxicillinanddicloxacillinsodium

2.9样品测定

取样品3批，按“2.2.2”项方法制备，依法测定，按外标法计算。结果见表2。

表2阿莫西林和双氯西林的含量测定(n=3)(略)

Tab.2Contentsofamoxicillinanddicloxacillinsodium

3讨论

3.1检测波长的选择

取供试品溶液适量，加流动相溶解并稀释，在波长200～600nm之间进行紫外扫描，结果阿莫西林和双氯西林在225nm下均有较高的响应。参照美国药典24版中双氯西林钠HPLC法测定的检测波长225nm[5],选择225nm为本法的检测波长。

3.2离子对浓度的选择

实验中考察了不同离子对浓度(0.005mol/L、0.006mol/L、0.007mol/L、0.008mol/L、0.01mol/L)对分离的影响，发现浓度低于0.007mol/L时，离子对不起作用，0.008mol/L时保留适宜，分离效果好，而当浓度大于0.01mol/L时，流动相浊度较大，且长链离子对浓度过高容易形成胶束，可使溶质的k值出现极大值的现象，另外可能对柱效有一定的影响。实验证明，采用0.008mol/L的浓度可保证柱效、峰型及保留时间均较好。

3.3流动相pH值的选择

对流动相的pH值进行考察，流动相pH值低于4.0，阿莫西林及双氯西林的保留均加强，不易洗脱;pH值大于6.0时,峰变形。经考察，pH值在4.5时阿莫西林及双氯西林的峰型最好，且柱效最佳。

3.4耐用性考察

分别使用国内外不同品牌十八烷基键合硅胶色谱柱，不同品牌的高效液相色谱仪，对同一批样品进行测定，其结果基本一致。表明该方法耐用性较好。

3.5方法的优点

本法使极性相差较大的阿莫西林和双氯西林在同样的色谱条件下均有适宜的保留，可在10min内完全被洗脱。可用于阿莫西林和双氯西林不同制剂的含量测定。