茶薪菇总氮含量的测定研究

【摘要】[目的]测定茶薪菇中总氮的含量及比较凯氏定氮法与分光光度法在茶薪菇总氮含量测定的优越。[方法]采用凯氏定氮法与分光光度法。[结果]两种方法测得茶薪菇总氮含量基本相同，为30.70mg/g。两种方法无显著性差异(P>0.1)。[结论]分光光度法法具有操作简便，快速，准确等优点，可以用于测定总氮的含量。

【关键词】茶薪菇;总氮;凯氏定氮法;分光光度法;含量测定

茶薪菇(AgrocybeCylindracea(Dc.exFr.)R.Maire)又名茶树菇、杨树菇、柳松茸。属担子菌纲，伞菌目，粪锈伞科，田蘑属。民间称之为“神菇”，是一种新开发的野生真菌。该菇味道鲜美，脆嫩爽口，营养丰富。据报道茶薪菇中含有丰富的氨基酸和矿物质元素，特别含有人体需要的17中氨基酸，其中赖氨酸含量高达1.75%，经常使用能增强记忆，具有健脾、利尿、祛湿、止泻等功效。近年来发现它能提高机体免疫能力，抗衰老，降低胆固醇、防癌、抗癌的特殊功能，是一种不可多得的食药兼用珍稀菌类[1]。

目前对茶薪菇的研究主要集中在多糖的研究，李宁宁等[2]以脉冲式电流直接刺激离体腓肠肌作为疲劳模型，探讨了茶薪菇多糖对改善疲劳状态下肌力减退的作用，傅明辉等[3]茶薪菇子实体多糖的抗氧化性进行了研究，李肇奖等[4]通过正交试验等方法研究了茶薪菇菌丝体多糖提取方法，而对其总氮含量的测定尚无报道。为了探讨其营养成分，本文采用凯氏定氮法[5]和分光光度法[6]对其总氮的含量进行了测定，并对两种方法进行了初步的探讨。

1材料

1.1药材茶薪菇产自浙江庆元县并由浙江中医药大学熊耀康教授鉴定为粪锈伞科茶薪菇(AgrocybeCylindracea(Dc.exFr.)R.Maire).

1.2试剂消化液(30%H2O2:H2SO4=4:1);萘氏试剂(碱性的碘化汞钾：按照2005版中国药典配制);聚乙烯醇液(0.1g/L)，混合指示液(1份的0.1%甲基红乙醇溶液与5份的0.1%溴甲酚绿溶液临用时混合)。其它试剂均为分析纯。

1.3仪器全自动回流消化仪(重庆南岸玻璃仪器厂)、772型可见分光光度计(普惠上海分析仪器有限公司)、凯氏定氮仪。

2实验方法与结果

2.1凯氏定氮法

2.1.1盐酸标准溶液的制备精确移取36.5%的浓盐酸2.5ml于500ml的容量瓶中，加水稀释，定溶后用基准硼砂标定即得浓度为0.06151mol?L-1标准溶液。

2.1.2供试品液的制备精密称取0.5g茶薪菇样品加入到全自动回流消化仪中，再加入0.2gCuSO4，3.0gK2SO4和10ml浓硫酸，放置电炉上加热，至液体变成透明澄清后继续加热30min，冷却后将液体定溶至100ml容量瓶中，作为供试品溶液。

2.1.3总氮的测定取10ml供试品液加入凯氏定氮仪的蒸馏瓶中，按药典法[5]蒸馏，蒸出液用盐酸标准溶液滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，记录盐酸所用的体积，算出总氮的含量。并用空白试验校正。结果见表1。

2.2分光光度法

2.2.1标准品液的制备：精密称取0.7630gNH4Cl，加入至250ml容量瓶中，用蒸馏水溶解，定溶。即得含氮浓度为79.94mg?L-1标准品溶液。

2.2.2供试品液的制备：精密称取0.3g茶薪菇样品加入到全自动回流消化仪中，再加5ml浓硫酸，加热至全部变黑后，加消化液8.0ml，加热回流消化至无色透明，再继续加热2min以除去氧化剂。冷却后用蒸馏水定容到50ml容量瓶中，即得。平行做5份。

2.2.3标准曲线的制作取7个25ml的容量瓶，各加标准品液0.00，0.30，0.60，0.90，1.20，1.50，1.80ml，加聚乙烯醇液20ml，加奈氏试剂1.00ml，再用聚乙烯醇液定容。同行试剂空白，在460nm处测定吸光度，得吸光度A与浓度C(μg)的回归方程。A=0.0047C-0.0115，r=0.9995，表明在0.00～143.89μg浓度范围内，吸光度与浓度呈线性关系。结果见表2。严志强，等:茶薪菇总氮含量的测定研究

2.2.4样品的含量测定：精密吸取5份供试品液0.75ml入25ml容量瓶中，加聚乙烯醇液20ml，按“2.2”项下操作，测定吸光度，并计算样品中总氮含量，结果见表3。

2.2.5稳定性试验：用新鲜配制的标准NH4Cl溶液，取一定量加入25ml的容量瓶中，加聚乙烯醇液20ml，按“2.2”项下操作，在0～6h内测定其吸光度，结果表明在4h内吸光度稳定。见表4。

2.2.6加样回收试验：精密吸取0.30ml已知浓度的供试品液(5份)入25ml容量瓶，各加入23.98μg标准品溶液，其余操作按“2.2”项下方法进行，测定吸光度，并按回收率(%)=测得值/(样品量+加入量)×100%，计算回收率。结果见表5。

3讨论

3.1实验分别采用凯氏定氮法与分光光度法测定茶薪菇中总氮含量，由表1和表3可知两种方法所测得总氮含量基本相同。经统计学t检验法处理，实验结果表明两种测定方法无显著性差，P>0.1。

3.2目前国内测定食品与中药中的总氮多用凯氏定氮法，该方法以其测定结果稳定，准确，被国内外广泛采用[7]，但从快速和方便的要求来衡量，此法操作繁琐，消耗时间长，一般为4～5h，另试剂消耗量大，并消化时排放的SO2对人体健康造成直接危害，而且费时，费电，费水[8]。

3.3本实验采用了分光光度法测定总氮含量，使用全自动回流消化装置，可以将消化时排放的SO2吸收掉，消除环境污染;以过氧化氢-浓硫酸为消化液，使消化的速度大大的提升，节省时间。并取代了蒸馏滴定步骤，既节约了时间和水电，又克服了凯氏定氮法操作过程繁琐，仪器安装复杂、试剂消耗量大等缺点。且具有操作简便，快速，准确等优点，用萘氏试剂显色，并加入聚乙烯醇液试剂可以稳定萘氏试剂与氨形成的胶状结合物，使测定液透明，显色稳定。实验结果表明其方法稳定性可达4h，其平均回收率为98.44%。

3.4由本实验可知，浙江庆元生产的茶薪菇总氮含量较高，折算成粗蛋白含量为19.31%，具有较高的营养价值，值得进一步开发和研究。