桂枝、柴胡与白芍分别配伍的相关药效学研究

【摘要】目的:研究桂枝、柴胡与白芍分别配伍后的相关药效学作用。

方法:以酚红比色法观察生理状态下小鼠胃排空、小肠推进功能;放免法测生理状态下小鼠血清内皮素(endothelin，ET);给予小鼠以1.1%冰醋酸腹腔注射致痛、致炎法观察药物的抗炎、镇痛作用。

结果:与正常组比较，柴芍低剂量组抑制小鼠胃排空、小肠推进功能，差异有统计学意义(P<0.01);柴芍高剂量组抑制小鼠胃排空、小肠推进功能(P<0.001);各药对组对正常小鼠血清ET含量无明显影响(P>0.05)。与模型对照组比较，桂芍低和高剂量组、柴芍低剂量组均能减少小鼠扭体次数，差异有统计学意义(P<0.01);柴芍高剂量组减少小鼠扭体次数，差异有统计学意义(P<0.05);桂芍高剂量组降低小鼠腹腔毛细血管通透性，差异有统计学意义(P<0.05)。

结论:柴芍配伍后具有解痉作用与镇痛作用;桂芍配伍后具有镇痛、抗炎作用，且桂芍配伍后在镇痛作用方面具有协同作用。

【关键词】桂枝;柴胡;白芍;配伍;药效学;小鼠

1材料与方法

1.1材料

1.1.1动物

昆明种小鼠250只，普通级，体质量(20±2)g，雌雄各半，由湖南中医学院动物实验中心提供实验动物。

1.1.2药物

桂枝、柴胡、白芍。全部药材购自湖南中医药大学第一附属医院药房，经湖南中医药大学药植教研室鉴定为正品。硫酸阿托品注射液(无锡市第四制药厂，批号：990102);阿司匹林片(中国上海信谊药厂，批号：990201-193号)。

1.1.3仪器

FA1004电子分析天平(上海精科天平厂);DD-S型低速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);半自动生化光谱分析仪(法国西克曼公司)。

1.1.4试剂

ET试剂盒(北京科美东雅生物技术有限公司提供，批号20060625);苯酚红，分析纯(广州化学试剂厂，批号：980910);伊文思蓝(上海化学试剂采购供应站分装厂，批号：990807)。

1.2方法

1.2.1动物分组

先按性别和体质量分层，用随机数字表法随机分为25组。每组为10只，各组均为雌雄各半。小鼠胃排空、小肠推进功能实验及小鼠血清ET含量测定共分13组，正常组，桂枝低、高剂量组，白芍低、高剂量组，柴胡低、高剂量组，桂芍低、高剂量组，柴芍低、高剂量组，阿托品组，阿司匹林组，其中阿托品组为胃排空、小肠推进功能的阳性药物对照组，阿司匹林组为血清ET的阳性药物对照组;冰醋酸致炎、致痛小鼠扭体次数、腹腔血管通透性实验共分12组，测生理状态小鼠胃排空、小肠推进功能分组中正常组换为模型对照组，去阿托品组，余组同上。

1.2.2药物剂量按体表面积换算，相当于成人(70kg)剂量的5倍为小鼠的低剂量，10倍为高剂量。测生理状态小鼠胃排空、小肠推进功能;生理状态小鼠血清ET;冰醋酸致炎、致痛小鼠扭体次数、腹腔血管通透性的各组小鼠用药量(生药量)均为：桂枝低剂量6.5g/kg、高剂量13g/kg;白芍低剂量6.5g/kg、高剂量13g/kg;柴胡低剂量6.5g/kg、高剂量13g/kg;桂芍低剂量13g/kg、高剂量26g/kg;柴芍低剂量13g/kg、高剂量26g/kg。乙酰水杨酸80mg/100g;阿托品1mg/100g。

1.2.3小鼠胃排空、小肠推进功能测定采用酚红定量测定法[2]。各组给药灌胃体积为0.2mL/10g，1次/d，连续灌胃6d，末次给药1h后灌胃0.1%酚红0.8mL/只，给酚红30min后处死动物，取胃及小肠全段，并将小肠全长均分为5段.将胃肠各段放入3mL0.1MNaOH液中消化提取。经24h消化后以1mL20%三氯乙酸沉淀蛋白，经3000r/min离心15min，取上清液1mL，加入3mL0.5MNaOH.混匀后于560nm波长比色，记录OD值。

1.2.4ET采用放射免疫法测定各组给药灌胃体积为0.2mL/10g，1次/d，连续灌胃6d后取血，按照试剂盒说明采用放射免疫法测定。

1.2.5小鼠扭体次数的观察[3]306各组给药灌胃体积为0.2mL/10g，1次/d，连续灌胃6d，末次给药1h后，腹腔注射1.1%冰醋酸，注射后5～20min内直接观察动物的扭体次数。

1.2.6小鼠腹腔血管通透性的测定[3]306各组给药灌胃体积为0.2mL/10g，1次/d，连续灌胃6d，末次给药1h后，腹腔注射1.1%冰醋酸，于注射后30min，每鼠尾静脉注射0.5%伊文思蓝生理盐水溶液0.1mL/10g体质量。20min后脱颈椎处死，轻揉腹部50次后，剪开腹部皮肤肌肉，用5mL生理盐水冲洗腹腔.并收集腹腔液，经3000r/min离心5min取上清液于590nm比色，记录OD值。

1.3统计学分析

计量资料结果用x±s表示，各组间比较，先进行方差齐性检验，如方差齐用两两比较用LSD检验;如方差不齐，则按秩和H检验。全部数据用SPSS12.0统计软件进行分析。结果用P值显示。

2结果

2.1不同配伍对正常小鼠胃肠推进功能的影响

与正常组比较，桂枝高剂量组胃、肠3段酚红低于正常组，表明其有增加胃肠推进功能的作用，差异有统计学意义(P<0.001，P<0.05);白芍低剂量组肠2段酚红高于正常组，表明其对胃肠推进功能有抑制作用，差异有统计学意义(P<0.05);柴芍低剂量组肠2段酚红高于正常组，表明其对胃肠推进功能有抑制作用，差异有统计学意义(P<0.01);白芍高剂量组肠3与肠5段、柴芍高剂量组肠2段、阿托品组肠2与肠5段酚红高于正常组，表明其对胃肠推进功能有显著抑制作用，差异有统计学意义(P<0.001)。其余各中药组对胃排空及小肠推进功能的影响无统计学意义(P>0.05)。(结果见表1)

2.2不同配伍对正常小鼠血清ET的影响

与正常组比较，阿司匹林组小鼠血清ET降低，差异有统计学意义(P<0.05)。其余各中药组对正常小鼠血清ET的影响无统计学意义(P>0.05)。(结果见表2)

2.3不同配伍对冰醋酸致痛小鼠扭体次数及腹腔血管通透性的影响

与模型组比较，白芍低剂量组、柴芍高剂量组均具有镇痛作用，差异有统计学意义(P<0.05);白芍高剂量组、桂芍低剂量组、桂芍高剂量组、柴芍低剂量组、阿司匹林组均具有镇痛作用，差异有统计学意义(P<0.01)，其中阿司匹林组作用较强(P<0.001);其余各组对小鼠扭体次数的影响无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较，桂枝低剂量组、桂芍高剂量组具有降低腹腔血管通透性的作用，差异有统计学意义(P<0.05);桂枝高剂量组、白芍高剂量组、阿司匹林组具有明显降低腹腔血管通透性的作用，差异有显著统计学意义(P<0.01)。其余各组对小鼠腹腔血管通透性的影响无统计学意义(P>0.05)。(结果见表3)

3讨论

药物组合或药对的配伍及其作用体现，是方剂学的特色，而散收相配、相反相成的配伍特点尤为突出[4]。桂芍相伍，出自《伤寒论》桂枝汤。桂枝辛温，发汗通阳主动;白芍酸寒，和营敛阴主静。二者配伍，一散一敛，散收结合，发汗之中有收敛之意，和营之中有调卫之功;桂枝发散因白芍之敛而不伤阴，白芍酸敛不滞邪。柴芍相伍，首见于《伤寒论》的四逆散得桂枝之散则。白芍养血敛阴，柔肝和血，缓急止痛，清解虚热;柴胡疏肝开郁，和解退热，升举阳气。白芍酸寒收敛，能敛津液而护营血，养血以柔肝，缓急而止痛，泻肝之邪热，以补脾阴;柴胡轻清辛散，能引清阳之气上升，以疏调少阳之气，而理肝脾、调中宫、消痞满。二药伍用，相互依赖，相互促进，互制其短而展其长。故以白芍之酸敛，制柴胡之辛散，用柴胡之辛散，又佐白芍之酸敛，以引药直达少阳之经，而清胆疏肝，和解表里，升阳敛阴，解郁止痛[4]。

散收配伍在方中起相反相成的作用，但如何将这一配伍方式及其不同药对作用的多样性加以揭示，需要引入现代研究方法，以便于了解和探讨散收药对二者相配后其作用的协同性或拮抗性、是否与单味药的药效有区别。本实验结果表明，桂枝、柴胡、白芍单味药不具有的药效，配伍后可有，且其在药效方面具有协同性。如桂枝、柴胡单味药对胃肠推进功能与血管通透性均无影响，而柴芍配伍后均可抑制胃肠推进功能，解痉作用增强;桂芍、柴芍配伍后均具有镇痛作用，且桂芍高剂量配伍后作用强于白芍单味药，桂芍高剂量还可降低毛细血管通透性显示出抗炎作用。同是散收配伍的药对，桂芍、柴芍等比例配伍后既可发挥相同作用，也可发挥不同作用。如桂芍、柴芍等比例配伍后均具有镇痛作用;而桂芍等比例配伍后具有抗炎作用，柴芍等比例配伍后具有解痉作用。两组药对对血清ET均无影响，可能与其发挥作用的有效成分有关，其对于血管系统的影响也可能是通过其它途径实现的，不能认为它们对血管系统无影响。为进一步揭示桂芍、柴芍配伍后药效变化及其物质基础，今后我们将结合化学成分变化与临床疗效做相关性研究。