HPLC法测定骨质宁搽剂中盐酸小檗碱的含量

【摘要】[目的]建立高效液相色谱法测定骨质宁搽剂中盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)含量的方法。[方法]C18色谱柱，流动相为乙腈—50mmol?L-1NaH2PO4水溶液(磷酸调PH=2.5)(25∶75)，流速1.0mL?min-1,室温,UV348nm检测。[结果]盐酸小檗碱在0.106～0.530μg(n=5)范围内线性关系良好(r=0.9999);方法精密度RSD为0.7%(n=6)。4批样品盐酸小檗碱的含量分别为19.11、18.81、18.83、18.92mg/100mg。[结论]方法专属性强、简便、准确;为该药提供了切实可行的质控方法。

【关键词】骨质宁搽剂;盐酸小檗碱;含量测定;HPLC

盐酸小檗碱有较强的抗菌等药理作用，为黄连、黄柏、功劳木等中药材中的主要有效成分，在中药成方制剂质量标准中较多的选用为含量控制指标[1]。骨质宁搽剂是由云母石、黄连、枯矾组成的中药成方制剂，其已有国家标准(标准编号：WS3—B—3945—98)的含量测定项是采用薄层色谱扫描法。在此标准的基础上我们进行了本注册药品的系列质量研究，并建立了用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，方法专属性强、操作简便、灵敏、准确。为该药提供了切实可行的质控方法。

1仪器与试药

美国WATERS高效液相色谱仪，510泵，484紫外检测器;N2000色谱工作站(浙江大学);盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所：供含量测定用，批号110713-200208)。骨质宁搽剂：规格为每瓶50mL;乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

2实验方法

2.1色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：DimonsilC18，5μm，4.6mm×150mm，室温;流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至2.5)(25：75);流速为1.0mL?min-1;理论板数以盐酸小檗碱计算为7000;主峰与前相邻峰的分离度为2.4;UV检测波长为348nm;对照品溶液进样10μL,供试品溶液进样5—10μL，外标法定量。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量，用甲醇配制成浓度为200μg?mL-1的溶液，再用流动相稀释10倍(1→10)，配制成浓度为20μg?mL-1的溶液。

2.2.2供试品溶液的制备精密量取本品2mL，置10mL量瓶中，加入流动相至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

3方法学考察

3.1.1专属性按处方制备不含黄连的阴性样品，按拟定的方法处理样品并测定，在小檗碱出峰区未见干扰峰(见图1—A)。

3.1.2线性关系及范围用甲醇准确配制每mL含盐酸小檗碱212μg的对照品溶液，再用流动稀释10倍(1→10)，配制成浓度为21.2μg?mL-1的溶液，依次准确进样5、10、15、20、25μL，按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积对进样量(μg)作回归处理,得回归方程和相关系数：

Y=2.1×103+2.955×106Xr=0.99999

结果表明盐酸小檗碱在0.106～0.530μg范围内呈良好线性关系。

3.1.3重复性试验取同批样品(批号041102)6份，分别依法处理、进样5μL测定，盐酸小檗碱峰面积的RSD为0.7%，示方法重复性良好。

3.1.4仪器精密度及样品溶液的稳定性

按上述色谱条件，精密吸取样品含量测定下对照品溶液10μL，重复进样5次，记录对照品峰面积积分值，RSD为0.3%。同时按拟定的方法，取样品(041102)一份，于10小时内，每间隔2小时测定一次，峰面积×105依次为：5.72、5.78、5.79、5.72、5.79，平均值为5.76，RSD为0.6%，溶液稳定。

3.1.5回收率试验

采用加样回收。精密量取已测含量的供试品(041102)1mL于10mL量瓶中，加对照品溶液(0.212mg/mL)600μL，用流动相稀释至刻度，摇匀。共制取6份，依法测定，结果见表1。

4样品测定结果

按所拟定的方法测定了四个批号(041102、041219、041222、041225)的样品，平行取样2份，测定，结果(mg/100mL)分别为：19.11、18.81、18.83、18.92，平均为18.9mg/100mL。对照和样品的HPLC图见图1—B和图1—C。

1.盐酸小檗碱(berberinehydrochloride，13.9min)

5讨论

5.1检测波长用本流动相溶解的盐酸小檗碱对照品溶液作紫外扫描，显示于228、264、348、425nm波长处有最大吸收。于348nm处检测阴性样品无干扰且主峰灵敏度理想，遂选择348nm为检测波长。

5.2柱效要求曾采用InertsilC18色谱柱，主峰与前相邻峰的分离度可达1.8，但理论板数以盐酸小檗碱计算仅为2800;后改用DimonsilC18，理论板数可达7000以上，获得满意的结果。