测定盐酸小檗碱片中小檗碱的含量

【摘要】[目的]建立荧光分光光度法测定盐酸小檗碱片中小檗碱的含量。[方法]采用荧光分光光度法以激发波长Ex=365nm，发射波长Em=409nm的条件下测定其荧光强度。[结果]小檗碱在0.946μg?ml-1～7.568μg?ml-1浓度范围之间线性关系良好，r=0.9993。平均加样回收率为97.51%，RSD=1.15%。[结论]方法简便易行,快速准确,可用于该制剂的质量控制。

【关键词】荧光分光光度法;盐酸小檗碱片;小檗碱;含量测定

盐酸小檗碱片是用于治疗肠道感染的常用抗菌药,其主要成分为盐酸小檗碱。有关其盐酸小檗碱的含量测定方法：2000年版《中国药典》采用的是反滴定法[1]，2005年版《中国药典》采用的是高效液相色谱法[1]。参考有关文献[3?5]，建立了荧光分光光度法测定盐酸小檗碱片中小檗碱的含量方法。报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器RF?5000荧光分光光度计(日本岛津公司)，UV?1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)，FA1004型电子天平(上海垒固仪器有限公司)，80-2离心沉淀器(江苏省金坛市医疗仪器厂)，CQ?250超声波清洗机(上海斯米达医疗器械有限公司)。

1.2试剂与药材盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号0713-9906)。盐酸小檗碱片：杭州民生药业集团有限公司，批号T06N548、T06K526(薄膜衣片);北京双鹤药业股份有限公司，批号0605004(黄色片);东北制药总厂，批号200605129、200609012(薄膜衣片)。薄层层析硅胶G(青岛海洋化工有限公司)，甲醇等其它试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1对照品溶液和供试品溶液的制备(1)对照品溶液的制备:精密称定干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品4.73mg，用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中，得盐酸小檗碱浓度为0.473mg?mL-1的对照品溶液。(2)供试品溶液的制备[2]:取盐酸小檗碱片20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于盐酸小檗碱20mg)，置100mL容量瓶中，加沸水适量使盐酸小檗碱溶解，放冷至室温，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2测定条件激发狭缝5nm,发射狭缝5nm,响应值:1.2,信号增益:×0.1,扫描扩展:1,积分时间:1.2;扫描速度:60nm/min,纸速:10mm/min;石英比色杯:1cm。

2.3激发波长与发射波长的选择将小檗碱对照品溶液用甲醇稀释后，在荧光分光光度计上扫描。由扫描图可知小檗碱最大激发波长为365nm，最大发射波长为409nm。

2.4pH条件的选择取小檗碱对照品溶液2mL，加入不同体积的1mol?L-1的NaOH溶液，在Ex=365nm，Em=409nm处分别测定其荧光强度。结果显示加入50μLNaOH溶液时，其荧光强度增加最大，超过50μL后其荧光强度降低。故确定加入50μL1mol?L-1的NaOH溶液。

2.5线性关系考察分别吸取盐酸小檗碱对照品溶液10.0、20.0、40.0、50.0、60.0、80.0μL入5ml的容量瓶中，再各加入50μL1mol?L-1氢氧化钠溶液，并用甲醇定容，摇匀后，在Ex=365nm，Em=409nm波长处依次测定荧光强度，结果表明，小檗碱在0.946μg?mL-1～7.568μg?mL-1浓度范围内与荧光强度有良好的线性关系，回归方程为Y=10.337X-1.897，r=0.9993。

2.6稳定性试验取同一浓度的对照品溶液和供试品溶液，按上述实验测定条件每隔20min测定一次荧光强度，连续测定7次，结果RSD=1.51%，表明在此条件下小檗碱的荧光强度在120min内稳定性良好。

2.7精密度试验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液30μL置5ml量瓶中，加50μL1mol?L-1氢氧化钠溶液至刻度，摇匀。按拟定条件重复测定6次，结果RSD=0.92%，表明精密度良好。

2.8供试品中盐酸小檗碱含量测定精密吸取供试品溶液20μL(每个样品3份)，入5ml的容量瓶中，再各加入50μL1mol?L-1氢氧化钠溶液，并用甲醇定容。摇匀后，在Ex=365nm，Em=409nm波长处依次测定荧光强度，由回归方程计算盐酸小檗碱含量。结果见表1。

表1小檗碱含量测定结果(n=3)(略)

2.9回收率试验精密称取已知含量的盐酸小檗碱片6份，分别加入与小檗碱含量相当的对照品溶液，按“2.1.2”法制备样品液，按“2.8”项下操作，测定其荧光强度，计算回收率，结果其平均回收率为97.70，RSD%为1.5%。

2.10重复性试验取同一批号的样品适量5份,精密称定,按“2.1.2”法制备样品液，按“2.8”项下操作，测定其荧光强度，计算盐酸小檗碱的含量，平均含量为96.39%，其RSD为0.98%。

3讨论

本文建立了荧光分光光度法测定盐酸小檗碱片中盐酸小檗碱片的含量。与HPLC法一样本法具有简便、快速、灵敏准确、重复性好、回收率高的特点，可适用于该制剂的质量控制。实验中曾根据文献[3]以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶7∶1∶1)为展开剂将供试品液展开,并在365nm紫外灯下定位,刮取黄绿色盐酸小檗碱荧光斑点(Rf值约为0.48)，再测定荧光强度。实验发现薄层-荧光分光光度法与直接荧光分光光度法测定盐酸小檗碱片的含量无显著性差异。由实验结果可知，不同厂家生产的盐酸小檗碱片其小檗碱的含量各有差异。